在第一態樣中，本發明提供一用於純化司美格魯肽之方法，本方法包括： 利拉魯肽2023 將粗司美格魯肽溶於包含鹵化溶劑之溶液中；以及 將溶液置於RP-HPLC純化系統中，並收集經純化之司美格魯肽分液。 如申請專利範圍第14項所述之方法，其中該磷酸鹽選自由磷酸三鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸三鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸三銨、磷酸氫二銨、磷酸二氫銨及其混合物組成的群組。 利拉魯肽2023 樣品前處理： 利拉魯肽粗肽係經由固相合成獲得，其純度為44.6%。
在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 利拉魯肽2023 mM之銨鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 mM之磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括20 mM磷酸鹽之水溶液。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比5-35%的氟化醇和0.1-1%的氟化酸。 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比15-20%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇（HFIP）和0.1-1%的氟化酸。 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比20-30%的2,2,2-三氟乙醇（TFE）和0.1-1%的氟化酸。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟中的鹵化溶劑選自由氟化酸、氟化醇、氯化溶劑及其混合物組成的群組。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 250mm時，第三次純化的流速為4至8 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 25 cm時，第一次純化的流速為約4.7 mL/min。 第一次和第二次純化的流速取決於RP-HPLC製備管柱的尺寸。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為5 cm 利拉魯肽2023 × 22 cm至8 cm × 12.6 cm時，第一次純化的流速為約50至200 mL/min。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括銨鹽）以及流動相D（包括乙腈）。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括磷酸鹽）以及流動相D（包括乙腈）。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C及流動相D，各包括一銨鹽或磷酸鹽。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C以及流動相D，各包括一銨鹽。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括銨鹽水溶液）以及流動相D（包括銨鹽水溶液和乙腈）。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括磷酸鹽水溶液）以及流動相D（乙腈）。
在一些具體實施例中，流動相A與流動相B各包括體積百分比0.1-1%之三氟乙酸。 在一些具體實施例中，流動相A與流動相B各包括體積百分比0.1-0.5%之三氟乙酸。 在一些具體實施例中，流動相A與流動相B各包括體積百分比0.1-0.3%之三氟乙酸。 在一些具體實施例中，流動相A與流動相B各包括體積百分比約0.2%之三氟乙酸。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
以流動相C稀釋含有92.17%純度之利拉魯肽分液，隨後裝載至RP-HPLC管柱(其填充C8之10 μm二氧化矽，且直徑與長度為4.6 mm x 100 mm)上。 利拉魯肽2023 將990.3毫克之粗利拉魯肽溶於11.22 mL之六氟異丙醇溶液(含有17% HFIP之0.2% TFA溶液)中。 將19.5克之粗利拉魯肽溶於238 mL之六氟異丙醇溶液(含有17% HFIP之0.2% TFA溶液)中。 以33%之銨將含有90.58%純度之利拉魯肽分液調整至pH值為8.5，並以pH值為8.5之20 mM甲酸銨稀釋，隨後裝載至RP-HPLC管柱(其填充C8之10 μm二氧化矽，且直徑與長度為8 cm x 12.6 cm)上。
- 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C與流動相D，其各包括銨鹽或磷酸鹽。
- 儘管採用上述之純化方法，但仍需開發更高效及改進的方法，以純化司美格魯肽或利拉魯肽。
- 在一些具體實施例中，磷酸鹽係選自於由磷酸三鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸三鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸三銨、磷酸氫二銨、磷酸二氫銨及其混合物組成之群組。
- 在一些具體實施例中，依據梯度表2，流動相D係以體積百分比5至70%之線性梯度沖提，其中流動相C為15 mM甲酸銨之水溶液且pH值為約8.3；以及流動相D為乙腈。
- 本發明內容已藉由前文的具體實施例及實例詳述，以使概念清晰易懂，但所屬技術領域具通常知識者將了解，可在所附請求項界定的範圍內對本發明進行特定變化和修飾。
在一些具體實施例中，流動相C包括20 mM之甲酸銨水溶液。 在一些具體實施例中，流動相C包括20 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.5。 在一些具體實施例中，流動相C包括乙腈與20 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.5，其中水溶液與乙腈之體積比率為95與5。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，步驟之RP-HPLC純化系統包括第一次RP-HPLC純化與第二次RP-HPLC純化；第一次RP-HPLC純化係於pH值小於7之下進行；以及第二次RP-HPLC純化係於pH值大於7之下進行。 在第三態樣中，本發明提供一用於純化利拉魯肽之方法，本方法包括： 將粗利拉魯肽溶於包含鹵化溶劑之溶液中；以及 將溶液置於RP-HPLC純化系統中，並收集經純化之利拉魯肽分液。 如申請專利範圍第14項所述之方法，其中該流動相D於線性梯度下由體積百分比0-10%被沖提至50-100%。
在一些具體實施例中，流動相D進一步包括20 利拉魯肽 mM甲酸銨之水溶液。 在一些具體實施例中，流動相D進一步包括20 利拉魯肽 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.5。 在一些具體實施例中，流動相D包括20 mM甲酸銨之水溶液與乙腈；以及pH值為約8.5，其中水溶液與乙腈之體積比率為50與50。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，流動相B係以體積百分比約10至95%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。 在一些具體實施例中，依據梯度表3，流動相B係以體積百分比約10至95%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。 利拉魯肽 在一些具體實施例中，依據表1之梯度，流動相B係以體積百分比約10至95%之線性梯度沖提，其中流動相A為含有0.2%三氟乙酸之水溶液；以及流動相B為含有約0.2%三氟乙酸之乙腈溶液。
