於另一實施例中，該個體為實驗動物，例如囓齒動物(例如，小鼠、大鼠)、狗、豬或非人類的靈長類動物。 於某些實施例中，該個體為基因轉殖或基因改造動物(例如，基因轉殖小鼠或基因轉殖豬)。 於某些實施例中，所投予或使用之該化合物可抑制所需個體、或細胞、組織或生物樣本內之癌細胞微管聚合、結合β-微管蛋白、抑制微管組合、及/或誘發組織、生物樣本或個體內對多種藥物有抗性之癌細胞凋亡。 於某些實施例中，該有效量為有效抑制所需個體、或細胞、組織或生物樣本內之癌細胞微管聚合的量。 於某些實施例中，該有效量為有效結合所需個體、或細胞、組織或生物樣本內之β-微管蛋白的量。
相反地， AS1712處理並未活化外源性凋亡途徑指標半胱天冬酶-8(caspase-8)(圖4A)。 舌下癌2023 亦發現用AS1712進行24小時處理增加了細胞色素c之細胞質內濃度(圖4B)，而相同劑量的AS1712並未誘導HFB細胞凋亡或細胞色素c釋放(圖5A及5B)。 因此，AS1712僅誘導癌細胞中內源性凋亡途徑之活化。 對於測試的23種癌細胞株，其IC50值範圍於16至84nM(表2)，此呈現示例性化合物AS1712或示例性化合物AS1712之衍生物可用於治療各種類型的癌症。
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為了釐清AS1712是否誘導G2或有絲分裂細胞週期停滯，在CL1-0及H1975細胞之檢查點對細胞週期進行表徵，其發現AS1712增加有絲分裂期指標之細胞週期蛋白B1及磷酸化組織蛋白H3(phospho-histone H3，p-HH3)，但G2期指標之細胞週期蛋白A則沒有(圖4D)。 亦使用高通量細胞影像(high-content imaging)，對特定的有絲分裂期指標p-HH3進行染色，以測量有絲分裂指數(有絲分裂細胞比例)，其發現AS1712處理導致CL1-0及H1975細胞呈現劑量依賴地累積於有絲分裂期(圖4E)。 此外，使用α-微管蛋白免疫螢光染色法，直接評估紡錘絲組織，並觀察到紡錘絲之排列受到AS1712處理的破壞(圖4F)。 上述數據表示AS1712誘導有絲分裂細胞週期停滯。 舌下癌 於一些實施例中，該醫藥組成物為口服或非口服給藥。 具體地說，預期途徑為口服給藥、靜脈內給藥(例如全身性靜脈注射)、輸血、灌注、經血液及/或淋巴供給之局部給藥、及/或直接給藥至受侵部位，例如腫瘤內。
含有一個雜原子之示例性8員雜環基包含，但不限於，氮雜環辛基、氧雜環辛基及硫雜環辛基。 示例性5員雜環基團稠合至C6芳香環(本文亦稱為5,6-雙環雜環)包含，但不限於，吲哚啉基、異吲哚啉基 、二氫苯並呋喃基、二氫苯並噻吩基、苯並噁唑啉酮基及其類似者。 示例性6員雜環基團稠合至芳香環(本文亦稱為6,6-雙環雜環)包含，但不限於，四氫喹啉基、四氫異喹啉基及其類似者。 於某些實施例中，本發明所使用之烷基、烯基及炔基含有1-20個脂肪族碳原子。
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通常，於5%CO2及95%空氣之氛圍下，在潮濕培養箱中以RPMI 舌下癌2023 1640培養基或DMEM(補充有10%熱滅活胎牛血清及1%青黴素-鏈黴素)中培養細胞。 6μM的標準過濾，僅保留232 個小分子作進一步研究。 AS1712是該些分子中的其中一者，其在肺癌細胞上表現優異的細胞毒性作用，及癌細胞與正常細胞之間顯著的治療窗。 「投予」、「給藥」、「投藥」、或「施用」一詞是指植入、吸收、攝入、注入、吸入或其他可將本發明化合物或其組成物導入至個體的方式。 「不飽和」或「部分不飽和」是指包括至少一個雙鍵或三鍵的基團。
依據欲投予治療之個體的身分、體型及/或狀況，以及依據投予組成物之路徑，可調整醫藥組成物中活性成分、醫藥上可接受之賦形劑、及/或任何額外成分的相對量。 組成物可包含介於0.1%至100%(w/w，重量比)之間的活性成分。 醫藥組成物可大量製備、包裝及/或販售為單一單位劑量及/或複數單一單位劑量。 一「單位劑量」是指包含預定量之活性成分之醫藥組成物的個別量。
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於某些實施例中，R2a為視情況經取代雜環基(例如，經取代或未經取代之5-至10-員單環或雙環雜環，其中於雜環中之一或兩原子獨自為氮、氧或硫)。 於某些實施例中，R2a為視情況經取代芳基(例如，經取代或未經取代之6-至10-員芳基)。 於某些實施例中，R2a為視情況經取代雜芳基(例如，5-至6-員單環雜芳基，其中雜芳環系統中之一、二、三或四個原子獨自為氮、氧或硫；或經取代或未經取代9-至10-員雙環雜芳基，其中雜芳環系統中之一、二、三或四個原子獨自為氮、氧或硫)。 於某些實施例中，至少一 R2b為視情況經取代烷基(例如，經取代或未經取代C1-6烷基)。 於某些實施例中，至少一R2b為視情況經取代烯基(例如，經取代或未經取代C2-6烯基)。 於某些實施例中，至少一R2b為視情況經取代炔基(例如，經取代或未經取代C2-6炔基)。
本發明化合物之「預防有效量」是指足以預防一病狀、一或多種與該病狀相關之病徵或預防其復發的劑量。 化合物之預防有效量意指單獨或與其他藥劑併用而於預防病狀中產生預防效益之治療藥劑的劑量。 「預防有效量」一詞可包含能夠改善整體預防或提高另一預防藥劑之預防功效的劑量。 本發明化合物之「治療有效量」是指在治療病狀時，或使該病狀相關之一或多種病徵延緩、降至最小或消除時，足以產生治療效益的劑量。 化合物之治療有效量是指單獨或與其他治療併用而於治療病狀中產生治療效益之治療藥劑的劑量。
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進行體外微管成核分析，以測試AS1712是否直接抑制純化中心體處之新微管組合。 用AS1712或DMSO培養純化的中心體及微管蛋白。 AS1712實質上抑制了來自中心體之微管星體的形成(圖6E，左圖)。 微管纖維長度之定量分析亦顯示AS1712與DMSO處理之間有顯著差異(圖6E，右圖)。
於某些實施例中，該癌症對紫杉醇及/或長春花生物鹼有抗藥性。 於某些實施例中，該紫杉醇為太平洋紫杉醇及/或伊沙匹隆。 於某些實施例中，該長春花生物鹼為敏克瘤或敏畢瘤。 於某些實施例中，該癌症對太平洋紫杉醇及敏克瘤有抗藥性。 於某些實施例中，該增殖性疾病為對一或多種抗微管藥物治療有抗性之癌症(例如，與P-醣蛋白(P-gp)過度表達有關之對多種藥物有抗性之癌症(例如，對一或多種抗微管藥物(例如紫杉醇或長春花生物鹼)治療有抗性之癌症)))、及包括如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、頭部癌、頸部癌、頭頸癌或血癌之癌症。
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於某些實施例中，該有效量為有效抑制所需個體、或細胞、組織或生物樣本內之微管組合的量。 於某些實施例中，該有效量為有效誘發組織、生物樣本或個體內對多種藥物有抗性之癌細胞凋亡的量。 於某些實施例中，該有效量為有效抑制所需個體、或細胞、組織或生物樣本內之癌細胞聚合、結合β-微管蛋白、抑制微管組合，因而誘發組織、生物樣本或個體內對多種藥物有抗性之癌細胞凋亡的量。
將H1975裂解物分別與磁珠-AS1712(mag-beads-AS1712)或磁珠-控制組(mag-beads-control)於4℃培養過夜後，免疫墨點法呈現mag-beads-AS1712僅拉下β-微管蛋白(圖9A)。 舌下癌 接著，進行表面電漿共振研究，以測量微管蛋白-AS1712複合物的解離常數值。 舌下癌2023 將不同濃度的AS1712注入微管蛋白固定之感測晶片表面，並監測複合物之形成。
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在一些實施例中，該5-6員雜環基具有1個環上雜原子，其選自氮、氧及硫。 使用DMA-秋水仙素-結合的微管蛋白異質雙體晶體結構(PDB-ID：1SA0)進行嵌合研究。 使用Discovery Studio(Accelrys Inc.)進行分子嵌合，以評估AS1712於微管蛋白之秋水仙素結合位點中之可能結合模式。
可由酸或鹼催化產生互變異構化(即，該反應提供一對互變異構體)。 舌下癌 舌下癌2023 示例性之互變異構化包括酮-至-烯醇、醯胺-至-醯亞胺、內醯胺-至-內醯亞胺、烯胺-至-亞胺、及烯胺-至-(另一種烯胺)之間的互變異構化。 舌下癌 除非另有所指，否則在價數允許的情況下，本文所述之原子、基團或基可為未經取代或經取代。
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此外，若本發明之特定實施方式落入前案的揭示範圍，可由一或多項請求項中明確排除該內容。 基於該些實施方式應視為本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知的內容，即使 本文未明確排除，亦可排除該些內容。 無論是否與前案的揭示內容相關，本案請求項可基於任何理由排除本發明的特定實施方式。 除非另有所指，否則在本文及申請專利範圍中諸如「一」及「該」等詞彙均涵蓋一或多個。 本文及申請專利範圍所述之群組中的一或多個元素間包含「或」一詞時，除非另有所指，否則視為有一(個、者)、一個(或一者) 以上或所有的群組元素皆包含於、使用於、或相關於一給定產物或流程。 本發明包含了該群組之一特定元素包含於、使用於或相關於一給定產物或流程之實施方式。
- 將微管蛋白及秋水仙素與各種濃度的AS1712、諾考達唑、或敏克瘤在80mM PIPES、2mM MgCl2、0.5mM EGTA、pH 6.9中以37℃培養1小時。
- 示例性化合物AS1712及如RJ-LC-15-8之示例性衍生物具有強大的癌症治療潛力。
- 在某些實施例中，被治療之個體為哺乳動物(例如，人或非人類之哺乳動物)。
- 使用Discovery Studio中之Prepare Protein protocol(其對結構進行質子化並插入missing loop區域)，以準備初始的晶體結構。
- 「癌症」一詞是指由異常細胞所導致的疾病，其中該異常細胞不受控制地增生，且具有侵襲及破壞正常身體組織的能力。
於某些實施例中，至少一R4為視情況經取代烷基(例如，視情況經取代C1-6烷基)。 於某些實施例中，至少一R4為視情況經取代C1-6烷基(例如，視情況經取代甲基、乙基或丙基)。 於某些實施例中，至少一R4為視情況經鹵素取代烯基(例如，視情況經取代C2-C6烯基)。
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於某些實施例中，至少一R2b為視情況經取代苯基。 於某些實施例中，至少一R2b為視情況經取代雜芳基(例如，5-至6-員單環雜芳基，其中雜芳環系統中之一、二、三或四個原子獨自為氮、氧或硫；或經取代或未經取代9-至10-員雙環雜芳基，其中雜芳環系統中之一、二、三或四個原子獨自為氮、氧或硫)。 於某些實施例中，至少一R2b為氮保護基(例如，苄基、第三丁氧羰基(t-butyl carbonate,BOC或Boc)、胺基甲酸芐酯、9-芴甲氧羰基(9-fluorenylmethyl carbonate,Fmoc)、三氟乙醯基、三苯甲基、乙醯基、對-甲苯磺醯胺(p-toluenesulfonamide,Ts))。 「碳環基」或「碳環的」是指具有3至10個環上碳原子(「C3-10碳環基」)且在該非芳香環系統內不含雜原子之非芳香環狀烴基團。
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根據詳細描述、實施例及申請專利範圍，本發明之其他特徵、目的及優點將顯而易見。 如本文所用，「測定」、「評估」、「分析」、「測量」及「檢測」等詞是指定量及定性測定，因此，術語「測定」一詞在本文中可與「分析」、「測量」及其類似者互換使用。 在欲進行定量測定時，則使用「測定數量」其 其類似描述來表達。 在欲進行定性或定量測定時，則使用「測定量」或「檢測量」來表達。
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所提供之套組可包含本文所述之醫藥組成物或化合物，以及一容器(例如小瓶、安瓶、瓶罐、注射器及/或分配器包裝，或是其他適當的容器)。 於一些實施例中，所提供之套組可視情況地更包含一第二容器，其包含一醫藥賦形劑，用以稀釋或懸浮本文所述之醫藥組成物或化合物。 舌下癌2023 於一些實施例中，提供於第一容器及第二容器之本文所述的醫藥組成物或化合物可合併形成一單位劑型。
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於某些實施例中，該個體為哺乳動物(例如，非人類哺乳動物)。 於某些實施例中，該個體為馴養動物，例如狗、貓、牛、豬、馬、綿羊或山羊。 於某些實施例中，該個體 為伴生動物，例如狗或貓。 於某些實施例中，該個體為家畜動物，例如牛、豬、綿羊或山羊。
