此發明內容並非本發明之詳盡概述，且其並未明確本發明之關鍵/決定性元素或描述本發明之範圍。 其唯一目的係簡單呈現本文所揭示之一些概念，作為稍後呈現之較詳細描述之引子。 除非另有規定，否則在本文所用肽記法中，按照標準用法及習慣，左手方向係胺基酸(N端)方向，且右手方向係羧基端(C端)方向。
根據本發明之一實施例，該醫藥組合物包含治療上有效量之如本發明之任何上述態樣/實施例之抗體，及視情況醫藥上可接受之載劑。 腫瘤照片 一種如請求項1至16中之任一單離之抗-Globo H抗體或其抗原結 合部分之用途，其係用於製造供治療及/或預防Globo H-陽性癌症之藥物。 簡而言之，在0.5mL培養基中混合2×105個表現Globo H之TOV21G細胞及5μg小鼠IgG1同型物或MZ-2抗體(hMZ-2Lw)，並在37℃下培育15分鐘。 然後用1x PBS清洗彼等細胞三次，並再懸浮於培養基中至4×105個/mL。 將一百微升細胞轉移至24-孔盤之創傷愈合培養插片(Ibid目錄號80241)之孔中，並在CO2培養箱中培育8小時。
如本文所使用，術語「人源化抗體」係指含來自非人類(例如，鼠科)抗體及人類抗體之序列之抗體形式。 一般而言，人源化抗體將包括實質上所有至少一個及通常兩個可變域，其中所有或實質上所有超變環對應非人類免疫球蛋白之超變環，且所有或實質上所有FR區係人類免疫球蛋白序列之FR區。 人源化抗體視情況亦將包括(通常)人類免疫球蛋白之免疫球蛋白恆定區之至少一部分。 嚙齒動物抗體之人源化形式基本上將包含相同親本嚙齒動物抗體之CDR序列，但可包括某些胺基酸取代，以增加人源化抗體之親和力、增加穩定性或出於其他原因為之。 然而，因為CDR環交換會不均一地產生具有與來源抗體相同之結合性質之抗體，所以亦可在人源化抗體中引入框架殘基、參與支 持CDR環之殘基的變化，以保留抗原結合親和力。
如本文所使用，術語「治療上有效量」係指活性組分足以產生期望治療反應之量。 腫瘤照片 治療上有效量亦係其中治療有益效果超過化合物或組合物之任何毒性或有害效果之量。 圖5A至E顯示根據本發明之一有效實例之抗-Globo H IgG抗體之結合親和力，其代表締合及解離曲線擬合及解離常數(A：mMZ-2；B：cMZ-2；C：hMZ-2L；D：MK-1；E：hMZ-2Lw)。
- 透過有限稀釋，藉由對經Globo H-生物素抗原塗佈之盤的ELISA分析，篩選產生單株抗體之融合瘤細胞株。
- 藉由免疫球蛋白結構預測線上程式模擬原始及人源化MZ-2純系中之可變區之3-D結構。
- 投與本文所述抗-Globo H抗體或其抗原結合部分可包括調配成用於非經腸投與(例如，經靜脈內)、經黏膜(例如，經鼻內)、經眼睛或其他投與模式之醫藥組合物或醫藥調配物。
- 獲得能分泌高效價抗-Globo H IgG或IgM抗體之五種純系(分別命名為MZ-1至MZ-5)。
- 因此，用於本文所述方法之醫藥調配物/組合物可包含如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分及一或多種醫藥上可接受之載劑。
- 如請求項1之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：147組成之胺基酸序列，其中該胺基酸序列之倒數第三個序列「V」變成「I」，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：195組成之胺基酸序列。
在一實施例中，包含本文所述抗-Globo H-結合肽或抗-Globo H抗體之組合物可用於抗癌症療法。 此外，包含抗-Globo H-結合肽或抗-Globo H抗體之組合物可與其他抗腫瘤劑組合。 特定言之，本實施例提供特異性抗-Globo H抗體之互補決定區序列，其可用於各種抗-Globo H-結合肽中。 腫瘤照片2023 特定言之，本發明提供可結合至Globo H或其衍生物之人源化或嵌合抗體或者抗原結合片段。 較佳地，如上所述之序列一致性係至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
至少，各數字參數應至少根據所報告之有效數字及藉由應用普通捨入法理解。 如請求項11之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包括包含由SEQ ID NO：90組成之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO：135組成之胺基酸序列之輕鏈可變區。 使如本文所述之具有重鏈可變區及輕鏈可變區之本發明抗體接受實例2之結合親和力分析、實例5之締合及解離分析、實例6之CDC分析、實例7之ADCC分析及實例8之抗腫瘤分析，且顯示與cMZ-2抗體、hMZ-2Lw抗體及MK-1抗體類似之結果。
如本文所使用之片語「全身投與」、「經全身投與」、「周邊投與」及「經周邊投與」係指不同於直接進入目標位點、組織或器官(諸如腫瘤位點)地投與雙特異性或多特異性多肽劑，以使得其進入個體之循環系統，且因此經歷代謝及其他類似過程。 在另一實施例中，本發明單離之抗-Globo H抗體係能特異性結合至Globo H之人源化或嵌合抗體或者其片段。 術語「抗原決定基」係指習知上藉由免疫球蛋白VH/VL對結合之結構單元。
- 吾人進一步藉助使CDR及位於CDR側面之框架序列選擇性突變改良其結合親和力。
- 在另一實施例中，本發明提供一種重鏈可變區，其包含作為H-CDR1之SEQ ID NO：3、作為H-CDR2之SEQ ID NO：5及作為H-CDR3之SEQ ID NO：8。
- 如本文所使用之片語「全身投與」、「經全身投與」、「周邊投與」及「經周邊投與」係指不同於直接進入目標位點、組織或器官(諸如腫瘤位點)地投與雙特異性或多特異性多肽劑，以使得其進入個體之循環系統，且因此經歷代謝及其他類似過程。
- 如請求項11之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：87或90組成之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：135組成之胺基酸序列。
- 為了比較，亦分析市售抗-Globo H IgG3抗體(參見圖1E)、VK9抗體(參見圖1B)。
圖4A及B顯示據本發明之一有效實例之抗-Globo H IgG抗體之蛋白質折疊之模擬(A：小鼠MZ-2單株抗體；B：人源化MZ-2單株抗體)。 如請求項19之用途，其中該藥物可與以下組合使用：一或多種選自血管生成抑制劑、化療、放射或手術之其他治療。 如圖6中所報告，補體依賴性細胞毒性分析之結果顯示，含超過1.6μg/ml MZ-2抗體之人類血清在乳癌MCF-7細胞中引起補體依賴性細胞毒性。 亦在卵巢癌及胰臟癌細胞中觀察到類似趨勢，其中濃度高於約10及20μg/ml之MZ-2抗體在人類卵巢癌細胞株TOV21G(圖7)或胰臟癌細胞株HPAC(參見圖8)中產生劑量依賴性細胞毒性。 透過有限稀釋，藉由對經Globo H-生物素抗原塗佈之盤的ELISA分析，篩選產生單株抗體之融合瘤細胞株。 獲得能分泌高效價抗-Globo H IgG或IgM抗體之五種純系(分別命名為MZ-1至MZ-5)。
一般而言，此等結果顯示，本發明人源化MZ-2抗體可在MCF-7及TOV21G細胞中引起有效且劑量依賴性ADCC。 藉由免疫球蛋白結構預測線上程式模擬原始及人源化MZ-2純系中之可變區之3-D結構。 圖4A及B顯示小鼠MZ-2單株抗體(圖4A)及人源化MZ-2單株抗體(圖4B)之蛋白質折疊模擬。 為檢測抗-Globo H抗體之特異性及相對效價，混合各組醣類共軛珠粒，並各自以1：50稀釋。
例如，具有SEQ ID 腫瘤照片2023 NO：27之重鏈可變區及SEQ ID NO：231之輕鏈可變區的抗體之KD值係在1 x 10-7至1 腫瘤照片 x 10-10nM之範圍內。 片語「醫藥上可接受的」係指彼等在合理範圍的醫療判斷下適於與人類及動物組織接觸而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問 題或併發症，且符合合理的效益/風險比之化合物、材料、組合物及/或劑型。 各載劑必須在與調配物之其他成分相容之意義上係「可接受」且對患者不會造成傷害。 術語「賦形劑」、「載劑」、「醫藥上可接受之載劑」及類似用語在本文中可互換使用。 如本文所使用，「抗體突變體」或「抗體變異體」係指物種依賴性抗體之胺基酸序列變異體，其中物種依賴性抗體之一或多個胺基酸殘基已經修飾。 此等突變體必定與物種依賴性抗體具有小於100%序列一致性或相似性。
如請求項7之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：27或30組成之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：75或231組成之胺基酸序列。 如請求項3之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：147組成之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：195組成之胺基酸序列。 為建立腹膜內卵巢腫瘤模型，將1 x 106個TOV21G細胞經腹膜內(i.p.)注射至5週齡雌性NU/NU小鼠中。 兩天後，將小鼠分成4組，並經由尾部靜脈(i.v.)途徑投與100μg(以5mg/kg之治療劑量)人類IgG、抗-GloboH抗體hMZ-2Lw或MK1，一週兩次。 為監測腫瘤生長，在各不同批次實驗中，給荷瘤小鼠i.p.注射200μL螢光素(3.9mg/ml)，並藉由非侵入式IVIS系統以固定曝露條件檢測各小鼠之化學發光強度。
為了比較，亦分析市售抗-Globo H IgG3抗體(參見圖1E)、VK9抗體(參見圖1B)。 腫瘤照片 選擇用於製造人源化抗體之人類可變域(輕鏈及重鏈)對減少抗原性極為重要。 針對已知人類可變域序列之整個集合庫篩選嚙齒動物抗體之可變域之序列。 然後接受最接近嚙齒動物序列之人類序列作為人源化抗體之人類框架。 另一方法使用衍生自輕鏈或重鏈之特定子群之所有人類抗體之共有序列之特定框架。
在RPMI 1640培養基中，將嵌合MZ-2抗體稀釋至2x指定濃度，並將50μL等分試樣添加至各具有癌細胞之流管中。 腫瘤照片 將人類IgG(Fitzgerald，31-AI06)稀釋至相同濃度作為對照。 15分鐘後，將100μL來自健康人類提供者之正常人類血清添加至各管中，並在37℃下培育2小時。 用完全培養基清洗細胞一次，並再懸浮於200μL具有0.5μg/mL之碘化丙錠之完全培養基中。 如本文所使用之片語「非經腸投與」及「經非經腸投與」係指 不同於經腸及局部投與之投與模式，通常藉由注射。
所有確定之專利案及其他公開案明確地以引用的方式併入本文中，目的在於描述及揭示(例如)可與本發明相關之此等公開案中所述方法。 提供此等公開案僅係為了引用其先於本申請案之申請日期之揭示內容。 就此而言，任何內容均不應視為承認本發明者無權因為是先前發明或因為任何其他原因而先於此等揭示內容。
提供以下實例來闡述本發明之某些態樣及協助熟習此項技術者實施本發明。 無需進一步詳述，據信熟習此項技術者基於本文描述即可最大限度使用本發明。 如本文所使用，「醫藥上可接受的載劑」為適合個體使用，而無不當的有害副作用(諸如毒性、刺激及過敏反應)且符合合理的效益/風險比者。 同樣，在與醫藥組合物之其他成分相容之意義上，各載體必須係「可接受」。 在與調配物之其他成分相容之意義上，載體必須係「可接受」，且經選擇以最大限度減少活性劑之任何降解及最大限度減少在個體中之任何有害副作用。
